반응형 실험5 샘플에서 바이러스 플라스미드 재조합을 방지하기 위한 세 가지 팁 바이러스 벡터는 재조합되기 쉽습니다. 렌티바이러스 (lentiviral) 벡터에서 재조합 (recombination)은 종종 장말단 반복(LTR) 사이에서 발생합니다. 재조합 후, 하나의 플라스미드는 관심 있는 형질전환 유전자(일명 바이러스 게놈)를 가지고 있고 또 다른 플라스미드는 박테리아 선택 마커와 복제 원점을 포함합니다. 박테리아 배양 동안 항생제 내성 유전자와 원점을 가진 플라스미드만 복제되고 형질전환 유전자는 손실됩니다. 시간이 지남에 따라 재조합된 벡터 백본을 포함하는 박테리아는 전체 길이의 플라스미드를 포함하는 박테리아보다 더 자랄 것입니다. 샘플의 재조합을 어떻게 방지할 수 있나요?플라스미드 재조합은 바이러스 벡터(LTR 및 ITR), 다중 폴리 A 부위가 있는 플라스미드 및 .. 2025. 2. 22. Immunohistochemistry (IHC) 샘플 준비 냉동 (Frozen Tissue) vs. 파라핀 (Paraffin-embedded Tissue) Immunohistochemistry (IHC)는 특정 항체를 사용하여 조직 샘플에서 특정 항원을 측정하는 실험법입니다. IHC는 암 조직의 병리학적 평가, 종양의 예후 예측, 치료에 대한 반응 예측, 감염 유무 확인 등 수많은 연구 분야에서 적용됩니다. IHC 실험을 위한 샘플 준비조직은 파라핀 포매 (paraffin embedding) 또는 냉동보존(cryooreservation, freezing)을 통해 준비 및 보존됩니다. 종종 보존 방법은 고정 유형 (type of fixation)과 밀접하게 연관됩니다. 포르말린 고정 조직 (Formalin-fixed tisseus)은 일반적으로 고정 후 파라핀 포매하는 반면, 냉동 조직 절편은 냉동보존 후 알코올로 고정합니다. 각 방법에는 뚜렷한 장단점.. 2025. 2. 22. BrdU, BrdU staining 실험 전통적으로 세포 주기의 진행 정도는 세포가 S기에 들어갈 때 [3H] thymidine의 양을 측정하여 판단해 왔습니다. [3H] thymidine 정량은 scintillation counting이나 autoradiography에 의해 수행되는데 이 기술은 느릴 뿐만 아니라 방사성 동위원소의 취급 및 폐기가 가능한 사람과 장비가 필요하거나 하는 등의 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 이의 대안으로 thymidine과 유사한 화학적 구조를 가지면서도 보다 안정한 bromodeoxyuridine (BrdU)로 [3H] thymidine을 대체할 수 있습니다. BrdU가 활발하게 증식하는 세포의 새로 합성된 DNA 가닥에 통합된 다음에 dsDNA의 변성 과정을 거쳐 면역화학적으로 검출이 가능합니다. Brd.. 2024. 11. 20. G2 체크포인트(Checkpoint) 실험, 준비, 그리고 방법 목차 1. G2 체크포인트 2. 실험 준비 3. 샘플 고정(Fixation) 4. 샘플 준비 G2 체크포인트는 DNA 손상 시 세포의 유사분열을 차단하며, 암세포는 이 체크포인트를 비활성화하여 유전체 불안정성을 초래합니다. DNA 결합 염료를 이용해 DNA 양을 측정할 수 있으며, 히스톤 H3의 Ser10에서 인산화는 유사분열 세포를 표시합니다. 이를 통해 Anti-Histone H3 pSer10 항체, propidium iodine, 그리고 flow cytometry를 이용한 유사분열 세포의 정량화와 DNA 함량 분석 방법을 소개합니다. G2 체크포인트 G2 체크포인트는 DNA가 손상될 경우, 세포가 유사분열(mitosis)에 진입하는 것을 차단하고, 유전체의 완전성(genome integrity)을 .. 2024. 3. 9. 이전 1 2 다음 반응형
